Препарат га-40 у ветеринарній практиці
Актуальність проблеми проведення імуномодулюючої терапії в останні роки помітно зросла і обумовлено це наступними факторами:
1) накопичилися нові відомості про влаштування та функціонування імунної системи тварин-
2) з`явилося багато нових імуномодулюючих препаратів-
3) розширилася кількість нозологічних форм, при лікуванні яких застосовуються імуномодулюючі препарати-
4) імуномодулююча терапія стала активно впроваджуватися в практику не тільки лікарів-імунологів, а й лікарів інших спеціальностей.
Необхідно уточнити, що імуномодулятори – це лікарські препарати, які у терапевтичних дозах відновлюють порушені функції імунної системи. Таке уточнення важливо, оскільки останнім часом у засобах масової інформації, у науково-популярних виданнях рекламуються різні біологічно активні добавки, кисло-молочні продукти тощо.п. як засоби, що дозволяють нормалізувати роботу імунної системи.
Метою імуномодулюючої терапії є усунення клінічних проявів імунної недостатності, нормалізація вихідно змінених показників імунітету та підвищення тим самим ефективності терапії основного захворювання. Звідси показаннями до проведення імуномодулюючої терапії є лікування та профілактика імунної недостатності.
Найбільш частим показанням до проведення імуномодулюючої терапії є наявність у хворого тваринного синдрому вторинної імунної недостатності, проте застосування імуномодуляторів у комплексній терапії у пацієнтів з деякими формами первинних імунодефіцитів (наприклад, загальна варіабельна імунна недостатність, селективний дефіцит , ймовірно, шляхом активації роботи збережених ланок імунної системи.
Клінічними ознаками вторинної імунної недостатності (ВІН) є хронічні, часто рецидивні, уповільнені, важко піддаються лікуванню традиційними засобами інфекційно-запальні захворювання будь-якої локалізації, викликані опортуністичними або умовно-патогенними мікроорганізмами, а також патогенною до антибіотиків. При цьому зміни імунологічних показників можуть мати транзиторний характер і формуватися на пізніх етапах ВІН за відсутності адекватної терапії основного захворювання. Таким чином, синдром ВІН - це порушення імунної системи, що розвиваються в пізньому постнатальному періоді або у дорослих, що характеризуються хронічними інфекційно-запальними захворюваннями, торпідними до традиційної стандартної терапії.
Перш ніж починати імуномодулюючу терапію, лікарю-клініцисту необхідно вирішити питання про доцільність її проведення, вибрати імуномодулятор і визначитися з тривалістю його застосування.
Історія застосування лікувальних препаратів, створених із рослин, налічує тисячоліття. Традиційно подібні лікарські засоби користуються попитом та довірою у пацієнтів. У клінічній практиці не завжди є можливість швидко провести імунологічне обстеження, тому в розпорядженні практикуючого лікаря будь-якої спеціальності повинен бути препарат, який, м`яко впливаючи на імунну систему тварини, не має виражених побічних дій. Як такий препарат може бути використаний імуномодулятор рослинного походження ГА-40.
Принципи імуномодулюючої терапії, що рекомендуються для використання в клінічній практиці:
1. Основними показаннями до проведення імуномодулюючої терапії є лікування та профілактика імунної недостатності.
2. Підставою для призначення імуномодулюючої терапії є наявність клінічних ознак імунної недостатності.
3. Застосування імуномодуляторів доцільно проводити на фоні імунологічного моніторингу.
4. Імуномодулятори призначаються в комплексній терапії одночасно з етіотропними хіміотерапевтичними засобами.
5. Імуномодулятори можна застосовувати у вигляді монотерапії під час проведення імунореабілітаційних заходів.
Включення імуномодулюючих препаратів у комплексну терапію хворих з мляво- та тривало поточними запальними процесами, що супроводжуються змінами показників імунного статусу як уродженого так і набутого характеру, істотно підвищує ефективність традиційної терапії, що дозволяє проводити, значно скоротити тривалість лікування, збільшити ремісію захворювання, а значить, покращити якість життя тварини. Останнім часом значно зріс інтерес до імуномодуляторів як до засобів підвищення стійкості організму до інфекції. Швидкість дії імуномодуляторів, їхня висока клінічна ефективність, безпека застосування говорить про перспективність цього напряму терапії з метою профілактики інфекційних захворювань, що супроводжуються виникненням імунодефіцитного стану. Будь-яка патологія є причиною чи наслідком імунологічних порушень в організмі. В даний час багато уваги приділяється вивченню імунодефіцитних станів, за наявності яких тварина потрапляє до групи підвищеного ризику захворювання.
Причини імунодефіциту дуже різноманітні. Вони включають фактори внутрішньоутробного розвитку, що залежать від материнського організму (первинні імунодефіцити) та впливу різних імуносупресуючих факторів зовнішнього середовища (вторинні імунодефіцити). Мляві хронічні захворювання різної етіології призводять до порушення нормального функціонування імунної системи організму. Найчастіше зустрічаються захворювання такого роду у дрібних домашніх тварин - онкологічні захворювання (35%), закриті уповільнені гнійно-запальні процеси (10-12%), захворювання інфекційного характеру (10%), паразитарні захворювання (5%).
Патологічні процеси, що виникають при вищеописаних станах, призводять до зниження рівня цитокінів – сигнальних поліпептидних молекул імунної системи, здатних регулювати взаємодію головних біологічних систем організму – нервової, імунної та ендокринної. Цей дисбаланс призводить до виникнення нових патологічних процесів, пов`язаних з ослабленням протипухлинного, протибактеріального, протигрибкового та противірусного імунітету. Виникає явище тотальної імунної недостатності, знижуються процеси репарації та регенерації тканин, порушуються захисні властивості епітеліальної тканини, відбувається тривала персистенція інфекційного збудника в організмі з частими рецидивами захворювання. При вторинному імунодефіциті тварини насилу переносять будь-які стреси, починаючи від транспортування, зміни корму, вакцинації і закінчуючи застосуванням сильних антибіотиків як лікарські препарати.
Препарат ГА-40 є безпечним регулятором імунної системи організму домашніх тварин, іншими словами, це імуномодулятор, що відноситься до імунокоректорів імунореабілітаційного типу. Препарат створений на основі хроматографічно очищеної стандартизованої комбінації поліпептидів, виділених з екологічно чистого рослинного матеріалу, що отримується з кореневищ рослини Купена мутовчаста - Polygonatum verticillatum, сімействаLILIACEAE.
Використовується для лікування та профілактики захворювань дрібних домашніх тварин, що супроводжуються імунодефіцитними станами, у тому числі при гострих та хронічних запальних реакціях різного походження.
Імунокоректор позитивно зарекомендував себе в лікуванні та профілактиці таких захворювань дрібних домашніх тварин, як чума м`ясоїдних, інфекційний гепатит, парвовірусний ентерит, демодекоз і саркоптоз собак, панлейкопенія та інфекційний ринотрахеїт кішок, при гострих і хронічних захворюваннях.
Крім цього, отримані позитивні результати при використанні препарату для посилення та покращення якості імунної відповіді при вакцинації. ГА-40 має імунокоригуючу, протиінфекційну та протизапальну дію. Препарат підвищує загальну опірність організму тварини до патогенного фактора, насамперед за рахунок стимуляції функціональної активності основної ланки імунітету - моноцитів та макрофагів. Останні шляхом фагоцитозу знищують патогенні мікроорганізми і, водночас, стимулюють синтез медіаторів природного імунітету - цитокінів, які посилюють утворення антитіл. Таким чином, ГА-40 впливає на всі популяції імунокомпетентних клітин.
Лікувальна дія ГА-40 характеризується прямою протипухлинною непрямою, опосередкованою цитотоксичною дією на клітини пухлинних утворень, він має здатність посилювати ослаблену імунну реакцію організму або згладжувати наслідки неадекватно сильних реакцій. Практично з дня його створення з метою безпеки вінекспериментально досліджувався на різних видах тварин (миші, білі щури, морські свинки, кролики) на імунотропну активність, імунотоксичність, алергенність, мутогенність, ембріотоксичність, на гостру та хронічнутоксичність, а також проводилися дослідженняклітинних препаратів. -40.
Основні напрямки застосування препарату ГА-40
профілактика та лікування захворювань тварин вірусної, бактеріальної та грибкової етіології
активація компонентів протипухлинного імунітету
зняття поствакцинальних ускладнень та стресових станів
лікування вторинних імунодефіцитів тварин
стимуляція процесів репарації та регенерації тканин
підвищення загальної резистентності організму
Переваги препарату ГА-40
Висока ефективність та надійність
Природність походження
Відсутність шкідливих домішок
Можливість використання разом із симптоматичним лікуванням
Відсутність протипоказань та побічних реакцій організму на препарат
Хороша переносимість тваринами, підтверджена результатами клінічних випробувань
Доклінічна оцінка безпеки, що проводиться згідно з вимогами "Посібники з експериментального (доклінічного) вивчення нових фармакологічних речовин" (М., 2000), із застосуванням токсикологічних, патоморфологічних, біохімічних, гематологічних методів, не виявило жодних суттєвих відмінностей показників піддослідних груп тварин з контрольної групи, що свідчить про відсутність токсичного впливу засобу GA-40 у дозах, що досліджуються.
Щоденні спостереження протягом 3 місяців і протягом 6 місяців не виявило будь-яких відхилень у стані та поведінці тварин. Статистично значущої зміни маси тіла щурів та кролів, а також вагових коефіцієнтів внутрішніх органів, порівняно з контрольною серією, не виявлено. У тварин обох серій спостерігається нормальний темп наростання маси тіла.
У ході вивчення хронічної токсичності GA-40 у досліджуваних дозах у щурів (терапевтична, 10 та 50-кратна терапевтична доза протягом 3 місяців), у кроликів (терапевтична, 10 та 50-кратна терапевтична доза протягом 6 місяців) не виявлено статистично достовірних відхилень. біохімічних показників, що характеризують функціональну активність паренхіматозних органів та показників периферичної картини крові, а також патоморфологічних та гістоструктурних порушень внутрішніх органів.
Щоденне внутрішньочеревне застосування GA-40 у дозах 2, 20 і 100 мкг/кг у щурів не викликало функціональних порушень серцево-судинної, сечовидільної систем і не мало негативного впливу на психоемоційну та рухову активність тварин.
Таким чином, результати вивчення загальнотоксичної дії GA-40 на органи та системи організму експериментальних тварин (щурів та кроликів) свідчать про відсутність токсичної дії препарату.
Проведено також відповідно до вимог ФГК дослідження імунотропного ефекту препарату. У дослідах in vivo та in vitro досліджено дієна фактори вродженого та адаптивного імунітету.
У дослідах in vivo встановлено, що введення препаратамишам у дозах 2, 20 та 200 мкг/кг не призводить до зміни показників маси та клітинності селезінки порівняно з контрольними тваринами. При цьому спостерігається достовірне збільшення кількості антитілоутворюючих клітин у 1,5,2,4 та 2 рази для 2, 20 та 200 мкг/кг відповідно порівняно з тваринами, які не отримували препарат. Досліджені дози препарату впливають на реакцію гіперчутливості уповільненого типу.
Показано, що підшкірне введення препаратамишам у дозі 200 мкг/кг викликає достовірне підвищення фагоцитарної активності клітин перитонеального ексудату на 20% та зниження їх бактерицидної активності на 17%. Найменші дози препарату достовірного ефекту не викликали, проте виявили подібні тенденції.
Спільна культивація препаратів в концентраціях 1, 10 і 100 мкг/мл з лейкоцитами периферичної крові здорових донорів викликає придушення люмінолзалежної хемілюмінесценції як не індукованої, так і індукованої зимозаном. У відсутність зимозану спостерігалося достовірне зниження показника на 40 і 62%, при індукції зимозаном на 31 і 75% для 10 та 100 мкг/мл відповідно.
В умовах in vitro препаратів концентрації 100 мкг/мл достовірно пригнічує цитотоксичну активність NK-клітин на 52%, а в концентраціях 1, 10 та 100 мкг/мл викликає дозозалежне придушення не індукованої та індукованої ФГА проліферативної активності. При використанні 100 мкг/мл у присутності ФГА спостерігалося зниження проліферації на 37%, а відсутність мітогену на 54%.
Продемонстровано, що препарат концентрації 100 мкг/мл викликає достовірне підвищення продукції фактора некрозу пухлин-альфа мононуклеарними клітинами периферичної крові здорових донорів.Продукція цього цитокіну під дією перевищила таку під дією класичного індуктора фактора некрозу пухлин-альфа ліпополісахариду. Концентрація 10 мкг/мл також стимулює вироблення цього цитокіну, але ефект статистично недостовірний. Жодна з досліджених концентрацій (1, 10 та 100 мкг/мл) не мала значного впливу на продукцію інтерферону-гаму. Надалі було встановлено, що стауроспорин та геніштейн інгібують продукцію ФНП-б, активовану досліджуваним препаратом GA-40. Це може свідчити про те, що РКС і ТРК залучаються до регуляції цитокінової продукції, індукованої GA-40.
Серед PKC виділяють як Са2+-залежні, так і Са2+-незалежні кінази. Тому наступним етапом дослідження стала оцінка впливу GA-40 на накопичення внутрішньоклітинного кальцію для виключення тієї чи іншої групи РКС. Препарат не викликав підвищення внутрішньоклітинного кальцію в клітинах периферичної крові та значно придушив цей показник у лімфоцитах та нейтрофілах, активованих іонофором Са2+ - А23187.Можливо, GA-40 перешкоджає надмірній активації клітини знижуючи внутрішньоклітинну мобілізацію Са2+ або дія препарату на клітину здійснюєтьсяСа2+ -незалежним шляхом, т.е. у процес залучаються, найімовірніше, РКС із групи нових чи атипових, незалежні від Са2+ і активовані фосфатидилсерином. Це припущення було підтверджено інгібіторним аналізом. Дослідження показали, що в процес активації клітини під дією GA-40 залучається РКС з класу нових. Але, крім цього, класичні Са2+-залежні протеїнкінази також беруть участь у GA-40-опосередкованій активації клітини.
Враховуючи той факт, що в активації клітини під дією препарату GA-40 задіяні РКС, пов`язані з фосфатидилсерином, можна припустити, що препарат, що тестується, взаємодіє з мембраною клітини. Взаємодія може бути або рецепторною, або з фосфоліпідами, глікопротеїнами (Kilpatrick DC., 1999) або іншими компонентами клітинної мембрани.
З даних літератури відомо, що внутрішньоклітинні сигнальні шляхи, пов`язані з активацією РКС, призводять до активації ядерного фактора NF-kB (Ярилін А.А., 1999). Враховуючи отримані дані щодо участі РКС та індукції цитокінової відповіді препаратом GA-40 NF-kB є найбільш ймовірною мішенню дії GA-40.
Експериментальні дані підтвердили це припущення. В ядерних екстрактах клітин людської моноцитарної лінії U937, інкубованих у присутність 100 мкг/мл препарату виявлено р65-субодиниця NF-kB. Цей факт дозволяє з великою ймовірністю припустити, що кінцевим етапом сигналінгу, індукованого GA-40 є активація транскрипційного фактора NF-kB.
NF-kB регулює експресію цитокінів, факторів росту та ферментів, що беруть участь у формуванні активних форм кисню, зокрема перекису водню. Додавання препарату до лейкоцитів у максимальній із тестованих концентрацій викликало достовірне зниження внутрішньоклітинного перекису водню. Можливо, цей ефект пов`язаний з антиоксидантною дією препарату та підтверджує результати, отримані у попередніх дослідженнях (вплив на хемілюмінесценцію лейкоцитів). Або препарат включає інші сигнальні шляхи, що пригнічують надмірну активацію клітин.
Таким чином, можна намітити деякі етапи активації клітин під дією препарату GA-40. Препарат GA-40 взаємодіє з якимись мембранними структурами (рецептори – лектинові, Т-клітинний рецептор, фосфоліпіди, глікопротеїни або інші структури клітинної мембрани), розташованими, мабуть, переважно на лімфоцитах. В результаті відбуваються зміни структури фосфатидилсерину та активація тирозинових протеїнкіназ і як Са2+-залежних (РКСб, РКСг), так і Са2+-незалежних протеїнкіназ С (РКСе). Протеїнкіназний шлях призводить до активації транскрипційного фактора NF-kB та його транслокації в ядро. Активація NF-kB виявляється у підвищенні продукції ФНП-б. Не можна виключити включення інших сигнальних шляхів та їх взаємодію, оскільки спостерігається неоднозначний ефект препарату на клітини (пригнічення продукції перекису водню, відсутність підвищення експресії костимуляторних молекул макрофагами).
Грунтуючись на отриманих результатах, можна зробити висновок, що препарат "ГА-40" має виражений імунотропний ефект не надаючи при цьому імунотоксичної дії.При клінічних дослідженнях препарат застосовувався у випадках лікування дрібних домашніх тварин, зокрема кішок та собак, і в результатах показав на тваринах антинеопластичну імунотропну активність. На жаль, ми не вели облік записів, т.до. йшли клінічні випробування. Але велика кількість кішок і собак пройшли лікування з інфекційними захворюваннями, вторинними імунодефецитами, токсичними ураженнями печінки та ін. органів, пухлинами різних видів. Результати фактично ідентичні з результатами лікування людей.
Які ми маємо фактори на користь застосування препарату ГА-40 у ветеринарії?
1. Пептиди у складі препарату рослинного походження відповідно мають давнє походження і приймаються тваринними організмами як схожі пептиди або ідентичні.
2. Як ми знаємо, сигнальна система рецептор-лейкін-відповідь у всіх своїх проявах ідентична у всіх тваринних організмах.
3. Так як в 1 мг препарату ГА-40 міститься більше 800 низькомолекулярних пептидів, в процес відповіді залучається велика кількість різних рецепторів, що забезпечує широкий спектр дії препарату, відбувається вплив не тільки на основні причини захворювання, а також і супутні.
Експериментально доведено і клінічно спостерігається антисклеротичний, антиоксиндантний, протизапальний, антистресовий вплив на організм, виведення важких металів нирками без пошкодження та ін.позитивні прояви.
4. Препарат не має побічних ефектів (єдине протипоказання - передімплантивна вагітність,.е. перша третина періоду вагітності), що має велике значення у ветеринарній практиці, т.до. симптоматика ускладнень та передозування при прийомі ветеринарних лікарських препаратів не так ефективно діагнозується, як у людей.
5. Препарат простий у використанні – одна ін`єкція на день, інсуліновим шприцом, підшкірно, маленька доза та безболісна процедура.
Імуномодулятори рослинного походження мають явні переваги передпрепаратами мікробіологічного та синтетичного походження. По-перше, вони діють "м`яко", найбільш природним та фізіологічним шляхом. По-друге, практично не викликають побічних реакцій. І, нарешті, що, мабуть, найголовніше, впливають на різні ланки патологічного процесу. Синтетичні препарати або посилюють імунітет, або його послаблюють.
